Título: Hiperlipidemia induzida por Triton WR-1339 (Tyloxapol) em Ratos
Wistar Hyperlipidemia induced by Triton WR-1339 (Tyloxapol) in Wistar rats Short title
Luiz Carlos Bertges
*Prof. Dr. Associado do Departamento de Fisiologia do Instituto de Ciências Biológicas da Universidade Federal de Juiz de Fora.
Resumo:
RELEVÂNCIA FARMACOLÓGICA:Triton WR-1339 (Tyloxapol) tem sido utilizado por diversos estudos para induzir hipercolesterolemia em animais. Não foram encontrados, entretanto, trabalhos na literatura que esclareçam a qualidade e a durabilidade desse estado hipercolesterolêmico. Dessa forma, ao se estudar agentes hipocolesterolemiante em ratos, torna-se difícil determinar se a queda dos níveis de colesterol resultou do tratamento ou de sua metabolização ao longo dos dias. OBJETIVO DO ESTUDO: Determinar os níveis de colesterol em ratos Wistar ao longo dos 9 dias subseqüentes à aplicação do Tyloxapol. MATERIAIS E MÉTODOS: Amostras de sangue de 16 ratos foram coletadas através de punção da veia caudal e submetidas à dosagem de colesterol total. Posteriormente, foi administrada dose única de Tyloxapol na dose de 200mg/kg por via intraperitoneal. Novas amostras foram colhidas a cada três dias e também dosados os níveis de colesterol total. RESULTADOS: Ocorreu um pico de ação da droga após 72 horas da aplicação, com queda dos níveis comparáveis aos basais após esse período. CONCLUSÃO: A indução de hipercolesterolemia pelo do Tyloxapol mostrou ser eficaz em ratos Wistar em até 72 horas da aplicação da droga, após esse período os resultados podem não refletir a ação de agentes hipocolesterolemiantes que utilizem esse modelo.
Abstract PHARMACOLOGICAL RELEVANCE: Triton WR-1339 (Tyloxapol) has been used by several studies to induce hypercholesterolemia in animals. There were not found, so far, any literature papers that make clear the quality and the durability of the hypercholesterolemic state. Being so, when studying hypercholesterolemia in rats, it has become difficult to determine if the decrease in cholesterol levels is because the treatment or the spontaneous diminishing along the days due to the metabolism AIM OF THE STUDY: To determine the levels of cholesterol in Wistar rats up to 9 days after the application of Tyloxapol. MATERIALS AND METHODS: There were collected the blood samples of 16 rats through puncture of the caudal vein and the total cholesterol levels were dosed. After that, a single application of Tyloxapol in doses of 200mg/kg per via intra-peritoneal was performed. New samples were collected after each three days and total cholesterol levels were dosed again. RESULTS: It was observed a peak of the drug action after 72 hours of the application, returning to the basal values after 06 days. CONCLUSION: The induction of hypercholesterolemia by the use of Tyloxapol was effective in Wistar rats up to 72 hours after the application of the drug; afterwards the results may not reflect the action of hypercholesterolemiant agents that use the model proposed.
Keywords: Hiperlipidemia; Colesterol; Ratos; Wistar; Tyloxapol; Triton WR1339
1. Introdução
A hipercolesterolemia é uma das condições metabólicas que determina o surgimento de doenças degenerativas crônicas tal como a aterosclerose1,2,3. A formação das lesões iniciais parece, mais freqüentemente, originar-se do aumento focal do conteúdo de lipoproteínas dentro de regiões da íntima, devido não só a alterações na permeabilidade do endotélio sobrejacente, mas principalmente porque elas se ligam a constituintes da matriz celular, aumentando o tempo de permanência das partículas ricas em lipídios dentro da parede arterial4. No espaço extracelular da íntima as lipoproteínas
podem sofrem alterações e as evidências apontam um papel patogênico para tais modificações5.
A hipercolesterolemia, conseqüentemente, é um importante fator de risco para doenças cardiovasculares6,7,8 e a redução do colesterol plasmático e a proteção endotelial colocam-se como importantes providências para o controle da doença aterosclerótica e de suas complicações tais como o infarto agudo do miocárdio e a hipertensão arterial sistêmica9.
Há, em função disto, uma busca incessante de novos medicamentos para prevenção ou diminuição dos danos causados por problemas genéticos ou por dietas com excesso de gorduras que levam à hipercolestrolemia10. Têm-se tentado, para tanto, provocar o aumento do colesterol plasmático utilizando animais de laboratório para melhor entender a relação entre as alterações do metabolismo dos lípides e a aterogênese e testar possíveis tratamentos para sua redução11. Nesse contexto destaca-se o uso do Triton WR-1339, também conhecido como Tyloxapol (Sigma Aldrich), um detergente não aniônico de estrutura polimérica3 que tem sido utilizado com sucesso em diversos trabalhos para induzir hipercolesterolemia12,13,14,15,16,17.
Não foram encontrados, entretanto, trabalhos na literatura que esclareçam a qualidade e a durabilidade desse estado hipercolesterolêmico induzido em ratos pela administração intraperitoneal do tyloxapol. Dessa forma, ao se estudar drogas, plantas ou alimentos com objetivo hipocolesterolemiante em ratos, torna-se difícil determinar se a queda dos níveis de colesterol resultou do tratamento ou de sua diminuição espontânea ao longo dos dias, em função do metabolismo.
O objetivo desse estudo foi determinar os níveis de colesterol em ratos Wistar, ao longo de 9 dias após a aplicação do Tyloxapol, para assim obter parâmetros necessários para o estudo de drogas, plantas ou alimentos hipocolesterolemiantes.
2. Animais e método
Foram utilizados 16 ratos Wistar, adultos, machos, provenientes do biotério da Universidade Federal de Juiz de Fora. Os animais
foram pesados, acondicionados em gaiolas individuais e mantidos à temperatura ambiente em regime de claro-escuro de 12 horas e ofertados água e ração ad libitum.
Após um período de adaptação de 5 dias, os animais foram anestesiados com Ketamina e Xilazina por via intraperitoneal e, por punção da veia caudal, foram coletadas amostras de 0,5 mL de sangue. O material foi enviado a um laboratório de análises clínicas para dosagem do colesterol total através de kits enzimáticos (BioSiystems S.A.).
Logo após a coleta, foi administrado, por via intraperitoneal, Triton WR-1339 (Tyloxapol), adquirido do laboratório Sigma Aldrich, dissolvido em NaCl 0,9%, na dose de 200mg/Kg de peso corporal.
Os animais foram observados durante 9 dias, período em que também foram ofertados água e ração ad libitum. No terceiro, sexto, e nono dias foram colhidas novas amostras de 0,5 mL de sangue obedecendo os mesmos padrões da primeira coleta.
A análise estatística foi realizada através do programa SPSS ver. 11.0 e o teste one-way ANOVA para comparação de médias.
O estudo está de acordo com os Princípios Éticos na Experimentação Animal, adotados pelo Colégio Brasileiro de Experimentação Animal (COBEA), e foi aprovado pela Comissão de Ética na Experimentação Animal (CEEA) da Pró-reitoria de Pesquisa/UFJF. Protocolo nº 024/2007- CEEA.
3. Resultados
A média do colesterol, antes de se administrar o Triton WR 1339, foi de 62,88 (n=16) (Figura 1). Três dias após a administração da droga, houve um aumento de 354,68% desta média para valores de 285,9 (n=10) (p < 0,05) (Figura 1). Seis dias após a administração da droga, evidenciou-se uma queda de 60,43% em relação ao terceiro dia, com média de 113,11 (n=9), não havendo diferença em relação à média inicial (p < 0,05) (Figura 1). No nono dia a média foi de 66,5(n=6), também não havendo diferença estatisticamente significante em relação aos valores basais (p < 0,05) (Figura 1).
Dez animais morreram durante o estudo, sendo seis deles três dias depois da administração da droga, um seis dias após da administração e três, nove dias da administração do medicamento.
4. Discussão
Os resultados mostram que o Tyloxapol foi eficaz em aumentar os níveis de colesterol total sérico em relação ao basal, com um pico no terceiro dia após aplicação. No sexto e nono dia, entretanto, houve uma queda dos níveis lipídicos, não havendo mais diferença estatisticamente significante entre os valores obtidos e a dosagem basal. Isto sugere que em até 72 horas da aplicação do tyloxapol, na dose de 200mg/kg, é possível obter valores de colesterol elevados.
Diversos estudos também comprovaram que o Tyloxapol foi eficaz em elevar os níveis de colesterol plasmático em ratos Wistar quando administrado por mesma via e dose. Entretanto, apesar de mostrarem uma crescente elevação dos lípides ao longo de 24 horas, não se pode observar a durabilidade desse efeito nesses trabalhos18,19,20. Essa mesma conclusão foi observada também, quando se utilizou a droga por via intravenosa na dose de 400mg/kg21. Em um outro estudo22 que também utiliza o Triton WR-1339 e avalia dosagens de “dolichols”, um produto que participa do mesmo processo de biossíntese do colesterol, notou-se resultados também muito próximos ao encontrado no presente estudo. A dosagem sérica de tal produto ao longo de oito dias apresentou um pico no quarto dia e uma redução já no oitavo dia, porém com valores ainda maiores em relação ao basal. Esses dados indicam que o Triton WR 1339 atua nas concentrações tanto de dolichols quanto de colesterol de uma mesma maneira, uma vez que ambos compartilham do mesmo processo de biossíntese. Em camundongos pode-se observar um pico de ação em 24 horas e uma queda do colesterol plasmático após 48 horas do uso da droga 23.
Apesar de diversos estudos usarem o Triton WR 1339 como meio de induzir hipercolesterolemia em ratos, não foram encontrados
trabalhos na literatura que definam com clareza a variação dos níveis plasmáticos de colesterol por longos períodos.
Destacamos que ao longo do trabalho, houve morte de 10 animais, o que pode ser um fator limitante para futuros estudos que utilizem esse modelo de indução de hipercolesterolemia, por períodos prolongados.
Conclui-se que, a indução de hipercolesterolemia através do Triton WR 1339 mostrou-se eficaz em ratos, com pico em 72 horas após a aplicação da droga. Após esse período houve queda dos níveis para valores comparáveis aos basais, o que pode induzir a erros em pesquisas com agentes hipocolesterolemiantes por um tempo maior que três dias da utilização do medicamento.
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